母種培養基的配制
1. 母種培養基的種類
母種是菌種生產的關鍵，要求純度高，不能混生雜菌，同時母種的菌絲體較為纖細，分解培養料的能力較弱。因此，母種菌絲體需要培養在營養豐富，易被吸收，表面光滑易于鑒別有無雜菌感染的瓊脂培養基上。適合母種菌絲生長的瓊脂培養基種類很多，常用的有下列幾種：
① 馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂培養基： 馬鈴薯（去皮） 200克 瓊脂 20克 葡萄糖（或蔗糖） 20克 水 1000毫升
② 麥芽汁—葡萄糖—瓊脂培養基： 干麥芽 250克 瓊脂 15～20克 葡萄糖（或蔗糖） 10克 水 1000毫升
③ 胡蘿卜—葡萄糖—瓊脂培養基： 胡蘿卜 100克 瓊脂 20克 葡萄糖（或蔗糖） 20克 水 1000毫升
④ 蘑菇汁—葡萄糖一瓊脂培養基（適用于蘑菇）： 鮮蘑菇 250克 瓊脂 20克 葡萄糖（或蔗糖） 20克 水 1000毫升
⑤ 蛋白胨—葡萄糖—瓊脂培養基： 蛋白胨 2克 葡萄糖 20克 磷酸氫二鉀 2克 維生素B1（硫胺素） 0.5毫克 磷酸二氫鉀 0.5克 瓊脂 18克 硫酸鎂 0.5克 水 l000毫升
2. 母種培養基的制法
以最常用的馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂培養基的制法為例介紹如下：先將馬鈴薯去皮，洗滌，切成小塊加水1000毫升，煮沸15～20分鐘，取雙層紗布過濾，取其濾液，加入瓊脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加熱使其溶化，最后補足水分，使其容量仍為1000毫升。趁熱分裝于試管中，裝量約為試管長度的1/5左右，裝管時要注意不使培養基沾污試管壁和試管口。試管口塞上大小合適的棉花塞，塞入試管口內的長度為棉塞總長的3/5。塞好棉塞后，每10支作一捆，用牛皮紙包扎好后，置鐵絲網籠中，然后進行高壓滅菌。如作為孢子分離用，則將培養基分裝于三角瓶或培養皿中，然后高壓滅菌。
3. 母種培養基的消毒滅菌
母種培養基通常用高壓蒸汽滅菌鍋來消毒滅菌，常用的高壓蒸汽滅菌鍋有直式、臥式和手提式三種。將配制好后的母種培養基移入上述任何一種高壓蒸汽滅菌鍋中，在15公斤/平方厘米 壓力下，消毒滅菌30分鐘。
高壓蒸汽滅菌主要是依靠提高蒸汽的溫度來滅菌的，因此滅菌時，應將鍋內的冷空氣全部排除。否則，盡管壓力表上的壓力已達到要求，然而，滅菌鍋內的溫度卻未達到所需的溫度（表11）。排除冷空氣的方法是加熱后當壓力表上指針上升到0.5公斤/平方厘米時，打開排氣閥，放氣至指針仍回到“零”的位置。滅菌的時間是以排除冷空氣后，壓力回升到1.5公斤/平方厘米 時才開始計算。每次滅菌之后，要等壓力降到“零”時，才打開鍋蓋，否則，滅菌的液體會因突然減壓而外溢，玻璃器皿也會因突然降溫而破裂。
下表高壓滅菌時壓力的換算及其與溫度的關系 ：
磅/平方英寸 公斤/平方厘米 滅菌器中的溫度（℃）
排除空氣 未排除空氣
5 0.352 108.4 72
10 0.703 115.2 90
15 1.055 121.0 100
20 1.406 126.0 109
25 1.758 130.4 115
30 2.109 134.5 121
在沒有高壓蒸汽滅菌鍋設備的情況下，可用蒸鍋、蒸籠等進行常壓滅菌。由于密封性差，壓力升不高，溫度只能升至102℃左右因此要連續蒸4～6小時才能達到滅菌的目的。
高壓嚴菌后將試管取出排成斜面備用。
母種分離材料的選擇
1. 子實體的選擇
無論是用作孢子分離或組織分離的子實體，都要從產量高，長勢好，適應性強，無雜菌蟲害的群體中，選擇朵大，生長健壯的單生子實體作為分離的材料。
選作分離的子實體，成熟度要適當，如蘑菇、草菇具有菌膜，最好選菌膜將破而未破的成熟度，這種子實體發育已成熟，子實層又未受污染，因此能很快散出大量的無菌孢子。對沒有菌膜或菌膜自幼已破的食用菌，如香菇、平菇等，則以選取八分熟，正在釋放孢子的個體為最好；因為剛從擔子彈射出來的孢子基本上也是無菌的。
2. 菇木和耳本的選擇
木生食用菌如香菇、銀耳、黑木耳等，可以從它們生長的基質，即菇木和耳木作為分離的材料。選擇時，應從野生或人工栽培場所挑選子實體生長健壯，朵大，長勢好，菌絲在段木中發育旺盛，材質較為結實，尚未腐爛，一般是接種后一年內已出菇、出耳而無雜菌害蟲感染的幼齡菇木或耳木為最好。采去子實體后，截取適當部位，掛于通風處風干后，供分離時用。
母種的分離方法
1. 孢子分離法
是利用食用菌的有性孢子或無性孢子，萌發成菌絲，獲得細菌種的一種方法。按分離時挑取孢子的數目不同，又分為單孢子分離法和多孢子分離法兩種。蘑菇、草菇等由于孢子沒有性的區別，采用單孢子分離獲得純菌種，有結實能力，而其它食用菌如香菇、銀耳、黑木耳等由于孢子有性別之分，單孢子分離得到的菌絲不能結實，所以，只在育種上采用，生產上很少采用多孢子分離法，是把許多孢子接種于同一培養基上，讓它們萌發，自然交配而獲得純種，操作簡單易學，生產上經常采用。由于采集孢子的方法不同又分為如下幾種：
